百奧賽圖提供全面的藥效學(PD)研究服務,支持體內藥效研究。

  • 通過流式細胞術(flow cytometry)分析細胞表面或內部的標志物來分析腫瘤或其他組織的免疫細胞變化

  • 單個或多重細胞因子/趨化因子分析

  • RNA 表達分析

  • 免疫組化分析(IHC)

  • RO(受體占用率)測定

案例1:B-hCD137(4-1BB)小鼠的MC38模型分析腫瘤浸潤淋巴細胞(TILs)

腫瘤浸潤淋巴細胞(tumor infiltrating lymphoeytes,TILs)是近年來腫瘤免疫研究中較活躍的一類抗瘤效應細胞。它們主要由單核細胞和多核免疫細胞組成(即:T、B、NK細胞,巨噬細胞,中性粒細胞,DC細胞,肥大細胞,嗜酸性、嗜堿性粒細胞,等等)。有些細胞促進腫瘤生長,有些則抑制腫瘤生長,如下圖1所示。它們的組成因腫瘤類型和治療方法的不同而不同。腫瘤浸潤淋巴細胞的組成對于揭示腫瘤生長調控的細胞機制具有重要意義。治療干預后特定細胞類型的改變也可以作為藥效學(PD)標志物。

百奧賽圖已經建立起基于多色流式細胞術和多種同源小鼠模型(人源化小鼠、重度免疫缺陷小鼠等)的腫瘤浸潤免疫細胞分析服務,包括TIL分析,可為全球藥企和臨床研究機構提供優質服務。


癌癥

B-h4-1BB小鼠腫瘤浸潤免疫細胞的典型流式細胞術分析方案


典型流式細胞儀

流式細胞術進行TILs分析。將小鼠結腸癌MC38細胞(5×105)皮下移植到B-h4-1BB小鼠(人4-1BB胞外結構域替換掉小鼠胞外結構)體內,待腫瘤體積約為300±50 mm3時開始分組(n=3)和給藥。第0天以3 mg/kg的劑量給藥抗人4-1BB抗體(Ab1, Ab2)后2-4天收集腫瘤組織進行TIL分析。

抗體Ab1處理組,Treg細胞明顯減少,CD8/Treg比值升高,在CD4、CD8、Treg和CD11b細胞中4-1BB的表達也明顯下降。而經抗體Ab2處理后,Treg細胞含量或CD8/Treg比值無變化,CD4和Treg中4-1BB表達變化較小,CD11b+細胞中4-1BB表達顯著降低。結果表明,Ab1通過減少腫瘤中Treg細胞數量,對MC38腫瘤具有更好的抗腫瘤PD特征。

1.Luen SJ,Savas P,Fox SB等,“腫瘤浸潤淋巴細胞和免疫療法在乳腺癌中的新興作用”。病理學。2017; 49(2):141-155。


案例2:B-hCD40小鼠的細胞因子分析

細胞因子是由多種細胞產生的一組低分子量可溶性蛋白。它們包括白介素,干擾素,趨化因子,腫瘤壞死因子等,在調節人體的免疫反應中起重要作用。 CD40是主要在抗原呈遞細胞(APC)中表達的共刺激受體,其與T細胞上表達的配體CD154(CD40L)結合或激動性抗CD40抗體結合導致APC和T細胞的活化,并產生多種細胞因子。 百奧賽圖自主開發了B-hCD40小鼠(鼠CD40胞外域被人CD40胞外域取代),并利用抗人CD40抗體selicrelumab在小鼠MC38腫瘤模型(A,B)中進行了體內藥效研究驗證。用其他抗人CD40抗體治療的MC38 / B-hCD40模型中的多細胞因子分析結果表明,這些抗體的細胞因子表達也不同(C)。細胞因子介導的毒性是基于CD40治療藥物開發中重要的臨床安全考慮因素之一,因此,細胞因子表達分析有助于選擇具有細胞因子介導的毒性降低的有效抗人CD40抗體。


鼠結腸癌

將小鼠結腸癌MC38細胞皮下移植到純合B-hCD40小鼠體內,腫瘤體積約為150±50 mm3 (n=5)時分組。結果顯示抗人CD40抗體Selicrelumab可顯著抑制腫瘤生長,表明B-hCD40小鼠是進行抗人CD40抗體體內藥理藥效研究的優質模型。(A)腫瘤體積:平均值±SEM;(B)體重:平均值±SEM。


抗人CD40抗體處理B-hCD40小鼠的MC38結腸癌模型,然后 用LEGENDplexTM(Biolegend)進行細胞因子的多重檢測。 抗人CD40抗體治療導致IFN-γ,TNF-α,MCP-1和IL-27顯著增加。可以觀察到兩種CD40抗體具有不同的細胞因子特征。 細胞因子表達分析結果不僅可以抗人CD40抗體作用方式提供見解,還可以作為PD生物標記物,為選擇安全的抗CD40治療方案提供依據。



案例3:B-hCD3e小鼠的表征顯示,淋巴細胞中CD3+ T細胞的比例是抗體誘導細胞死亡(AICD)效應的PD標志物。

B-hCD3e-小鼠

C57BL/6 (A)和B- hCD3e (B)小鼠皮下移植結腸癌MC38細胞,待腫瘤體積約150±50mm3 后分組 (n=5)。mPD-1抗體均顯著抑制腫瘤生長,而hCD3e抗體顯著促進B-hCD3e小鼠腫瘤生長??谷薈D3e抗體促進腫瘤生長可能是抗體治療血液和脾臟中CD3 T細胞被清除(C),產生抗體誘導的細胞死亡(AICD)效應。結果表明,B-hCD3e小鼠對抗人CD3e調節有響應,B-hCD3e小鼠是研究抗人CD3e抗體療法的有工具。



48h后從外周血中分離淋巴細胞,用流式細胞術(C)檢測B- hCD3e小鼠血液中B細胞和T細胞的比例??谷薈D3e抗體處理組特異性CD3 T細胞比例明顯下降,抗鼠CD3e、抗鼠PD-L1或IgG對照抗體沒有顯示T細胞的耗竭(C,右)。此外,淋巴細胞中B細胞比例沒有發生變化(C,左)。這一觀察結果與AICD效應結果一致。


脾表

 

表1.組和治療信息。

小鼠品系治療
B一hCD3eG1hCD3抗體(OKT3)
G2CD3 / CD19雙特異性抗體
G3blinatuomomab
G4PBS
C57BL / 6G5mCD3抗體(145-2C11)
G6PBS

采用流式細胞術分別于24h、72h、168h檢測脾臟和血液中T細胞比例。



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